介绍孔雀石绿试剂盒的操作步骤

　　孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，其既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。

　　孔雀石绿试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

　　孔雀石绿试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被孔雀石绿抗原，样品残留的孔雀石绿和微孔条上预包被的抗原共同竞争抗孔雀石绿抗体，加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样品吸光度值与其残留物孔雀石绿呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中孔雀石绿的含量。

　　操作步骤：

　　1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

　　2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

　　3、洗涤工作液在使用前也需回温。

　　4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。

　　5加标准品/样品：加标准品/样品50μl/孔到对应的微孔中，然后加入抗试剂50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。

　　6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μl/孔，充分洗涤4～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

　　7、加酶标物：加入酶标物100μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。

　　8、显色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。

　　9、测定：加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。