建立化学发光免疫分析方法检测禽肉中氯霉素的残留

建立化学发光免疫分析方法检测禽肉中氯霉素的残留

王文珺， 陈银辉1，王立淼2，邢佑尚1，王照鹏1，江海洋2

（1. 北京维德维康生物技术有限公司，北京，100095；2. 中国农业大学动物医学院，北京，100193）

摘要：本研究的目的是建立检测禽肉中氯霉素残留的化学发光免疫分析方法（CLEIA）；通过方阵法确定包被抗体及酶标抗原的浓度，对体系优化后，建立了氯霉素直接竞争性CLEIA的标准曲线，用CLEIA与液质联用（LC/MS） 检测禽肉中氯霉素的含量。结果表明，本研究建立的检测禽肉中氯霉素残留的CLEIA法，检测限为15pg/g，CLEIA法的回收率为74.7%-107.8%，变异系数为4.5%-11.5%，CLEIA和LC/MS两种方法分析结果无显著性差异（P＞0.05）。

关键词：氯霉素；化学发光酶免疫分析；禽肉；液质联用

 Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay for the Determination of Chloramphenicol in Poultry 

WANG Wenjun1, CHEN Yinhui1, WANG Limiao2, XING Youshang1, 

WANG Zhaopeng1, JIANG Haiyang2

（1.Beijing WDWK Biotechnology Co, Ltd, Beijing 100095；2. college of Veterinary Medicine，China Agricultural University, Beijing 100193）

Abstract：The aim of this work was development a chemiluminescence Enzyme Immunoassay (CLEIA) for the determination of chloramphenicol in poultry. The concentrations of coating antibody and HRP labeled antigen of CLEIA for chloramphenicol were determinated with chessboard format and the standard curves of chloramphenicol were established．Poultry samples were spiked with chloramphenicol and the concentrations were detected with both CLEIA and LC/MS methods．The results showed that the detection limit of CLEIA was 15 pg/g for poultry； The recoveries of CLEIA were 74.7％-107.8％ and coefficients of variability were 4.5%- 11.5%．There were no distinct difference between the results of CLEIA and LC/MS（P＞0.05）, which showed CLEIA can be used for the detection of chloramphenicol in poultry.

Key words: Chloramphenicol (CAP)；Chemiluminescence Enzyme Immunoassay (CLEIA)；Poultry；LC/MS

氯霉素（CAP）属抑菌性广谱抗生素，zui初是从委内瑞拉链丝菌的培养液中提取制得，现在可用化学方法大量生产。氯霉素（结构式见图1）的结构与5′-磷酸尿嘧啶类似，所以它通过阻止细胞内氨基酞tRNA与核糖体50S亚基A位点的结合，从而阻挠蛋白质的合成。氯霉素曾被广泛应用于我国的畜牧业生产中，对畜禽的疾病控制和治疗起到了重要作用。但后来人们研究发现：氯霉素对人的造血系统和消化系统具有严重的毒性反应，可引发人的再生障碍性贫血；同时还会引起视神经炎和皮疹等不良反应[1]。因此氯霉素只在对其他抗生素耐药或不得不使用的严重病例中选用。目前，世界许多国家禁止在食用性动物使用氯霉素，欧盟、美国等国家均在法规中规定氯霉素残留*为“零容许量”，即不得检出。2002年，*235号公告《动物性食品中兽药zui高残留*》规定氯霉素及其盐、酯禁止用于任何食品动物，所有可食性组织不得检出。然而由于氯霉素的抑菌效果好，价格低廉，仍有被一些国家或动物食品生产商使用。对高密度、工厂化的家禽养殖业来说，氯霉素往往被用做药物添加剂，以避免动物高发病率情况的出现，所以时有禽肉中氯霉素超标的报道。

氯霉素残留方法的建立始于上世纪七十年代，到目前为止，已相继建立起了气相色谱、液相色谱、气质联用、液质联用及酶联免疫及化学发光等检测方法[2-5]。北京维德维康生物技术有限公司推出的氯霉素酶联免疫检测试剂盒，从检测限、灵敏度、稳定性、准确度等都达到了同行业水平。在该研究的基础上，我们又推出了化学发光免疫检测试剂盒，使得检测方法更为简单、灵敏和快速，便于实现对禽肉中氯霉素残留的筛查。

                                图1  氯霉素结构式

1.材料与方法

• 试剂与材料

氯霉素标准品、明胶、ProClin 300购自Sigma公司；氯霉素酶标抗原（北京维德维康生物技术有限公司自制）；化学发光酶标板，丹麦Nunc公司；乙酸乙酯、正己烷等试剂均购自北京国药集团。

   CLEIA所用的缓冲溶液：

（1）包被缓冲液: 碳酸盐缓冲液0.05mol/L，pH 9.6；

（2）0.02 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）：PB缓冲液中加入0.15 mol/L NaC1，pH 7.2；

（3）洗涤液：1000 mL PBS加1 mL Tween-20；

• 酶稀缓冲液：1000 mL PBS加1 mL Tween-20、1 g明胶和300 μL ProClin 300；

（5）封闭液：1000 mL PBS加入5 g明胶和300 μL ProClin 300。

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