酶联免疫试剂盒的使用和注意事项
更新时间：2017-06-30 点击次数：1491
ELISA（酶联免疫吸附试验，
酶联免疫试剂盒）是酶免疫测定技术中应用zui广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
酶联免疫试剂盒的操作使用：
1、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
2、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
3、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
4、酶联免疫试剂盒每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
5、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
6、在450nm波长处测定各孔的OD值。
为保证实验质量，使用酶联免疫试剂盒时需注意：
（1）合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。
（2）显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
（3）加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
（4）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
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